La préparation des échantillons pour l'analyse par microscopie électronique à balayage (MEB) comporte plusieurs étapes essentielles pour garantir que l'échantillon est correctement préservé et prêt pour l'imagerie détaillée.
7 étapes essentielles à suivre
1. Fixation primaire avec des aldéhydes
Cette étape consiste à fixer les protéines de l'échantillon à l'aide d'aldéhydes. Les aldéhydes permettent de préserver la structure des protéines et d'empêcher leur dégradation.
2. Fixation secondaire au tétroxyde d'osmium
Après la fixation primaire, l'échantillon est soumis à une fixation secondaire avec du tétroxyde d'osmium. Cette étape permet de fixer les lipides de l'échantillon et d'obtenir un contraste pour l'imagerie.
3. Série de déshydratation avec un solvant
L'échantillon est ensuite déshydraté à l'aide d'une série de solvants tels que l'éthanol ou l'acétone. La déshydratation élimine l'eau de l'échantillon et le prépare au séchage.
4. Séchage
Une fois l'échantillon déshydraté, il doit être séché. Cette opération peut être réalisée à l'aide de différentes méthodes telles que le séchage au point critique, la lyophilisation ou simplement le séchage à l'air. L'objectif est d'éliminer toute trace de solvant de l'échantillon.
5. Montage sur un stub
L'échantillon séché est ensuite monté sur un stub, qui est un petit cylindre ou disque métallique. Le stub fournit une plate-forme stable pour l'échantillon pendant l'imagerie.
6. Revêtement par pulvérisation cathodique avec un matériau conducteur
Pour empêcher le chargement et améliorer la conductivité, l'échantillon est recouvert d'une fine couche de matériau conducteur, tel que l'or ou le carbone, à l'aide d'une machine à pulvériser. Ce revêtement permet au faisceau d'électrons d'interagir correctement avec l'échantillon pendant l'analyse au MEB.
7. Consulter les directives du fabricant de l'instrument
Il est important de noter que les techniques spécifiques de préparation des échantillons peuvent varier en fonction de la nature de l'échantillon et des exigences spécifiques de l'analyse au MEB. Il est donc essentiel de consulter les lignes directrices et les protocoles du fabricant de l'instrument pour la préparation de l'échantillon.
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