Pour les lames histologiques permanentes, la méthode la plus largement utilisée pour le montage des spécimens est le montage sous lamelle avec un milieu de montage résineux. Cette technique implique de placer une substance claire, semblable à un adhésif, sur la section de tissu colorée sur une lame de verre, puis de la recouvrir d'une fine lamelle de verre pour créer une préparation permanente et de haute résolution pour l'observation microscopique.
Le montage n'est pas seulement une étape de protection finale ; c'est une procédure optique et archivistique critique. L'objectif principal est d'adapter l'indice de réfraction du spécimen à celui de la lame de verre, minimisant la diffusion de la lumière pour produire une image claire tout en préservant le tissu pendant des décennies.
Le but du montage : au-delà de la simple protection
Bien qu'une lamelle protège physiquement le tissu, le véritable but du montage est enraciné dans la physique de la lumière et la nécessité d'une conservation à long terme.
Obtenir une clarté optique
La fonction la plus importante d'un milieu de montage est de fournir une clarté optique. Lorsque la lumière passe d'une substance à une autre (comme de la lame de verre, à travers le tissu, et dans l'air), elle se courbe ou se réfracte.
Un milieu de montage est choisi parce que son indice de réfraction (généralement ~1,5) est très proche de celui de la lame de verre et du tissu fixé. Cette uniformité minimise la réfraction de la lumière, réduisant la diffusion et permettant une image nette, claire et de haute résolution sous le microscope.
Assurer une conservation à long terme
Une lame correctement montée crée un joint étanche à l'air. Cela protège la section de tissu délicate et colorée des dommages physiques, de la poussière, de l'oxydation et de la croissance microbienne.
Les milieux résineux permanents durcissent avec le temps, fixant de manière permanente la lamelle et créant un spécimen de qualité archivistique qui peut être stocké et étudié pendant des années, voire des décennies, sans dégradation significative.
Le cœur de la technique : les milieux de montage
Le choix du milieu de montage est la décision la plus critique dans le processus de montage. Ces milieux se répartissent en deux catégories principales, chacune ayant des utilisations spécifiques.
Milieux de montage résineux (non aqueux)
Ce sont les types les plus courants pour l'histologie de routine. Ce sont des résines synthétiques, comme les acryliques ou les polystyrènes, dissoutes dans un solvant organique tel que le xylène ou le toluène.
Étant donné que ces milieux ne sont pas miscibles avec l'eau, la section de tissu doit d'abord être complètement déshydratée à travers une série de bains d'alcool, puis "éclaircie" avec un agent comme le xylène avant le montage. Ce processus en fait la norme pour les colorations comme l'hématoxyline et l'éosine (H&E).
Milieux de montage aqueux
Ce sont des milieux à base d'eau, essentiellement des gels ou des sirops, utilisés lorsque le tissu ou la coloration ne peut pas supporter le processus de déshydratation requis pour les milieux résineux.
Ceci est essentiel pour des techniques comme l'analyse de coupes congelées, certains protocoles d'immunofluorescence, et les méthodes de coloration où la coloration est soluble dans l'alcool (par exemple, les colorations des graisses comme l'Oil Red O).
Comprendre les compromis
La décision entre les méthodes de montage est un équilibre entre le besoin de permanence et la compatibilité chimique de la procédure de coloration.
Permanence vs. Compatibilité
Les montages résineux offrent une qualité optique supérieure et sont considérés comme permanents. Cependant, les solvants utilisés (alcools, xylène) peuvent détruire ou extraire certains composants cellulaires, tels que les lipides, ou éteindre les signaux fluorescents.
Les montages aqueux résolvent ce problème de compatibilité mais sont généralement considérés comme non permanents ou semi-permanents. Avec le temps, la coloration peut s'estomper ou diffuser à travers le milieu, et le montage lui-même peut sécher et cristalliser, dégradant l'image.
Pièges courants : bulles d'air et débordement du milieu
L'erreur technique la plus courante est de piéger des bulles d'air sous la lamelle. Ces bulles obstruent la vue du tissu et sont difficiles à enlever une fois que le milieu commence à prendre.
Un autre problème est d'utiliser trop ou trop peu de milieu. Trop de milieu provoque le "débordement" du milieu de sous la lamelle, créant un désordre collant. Trop peu entraîne un joint incomplet et des zones sans dégagement optique approprié.
Choisir la bonne méthode pour votre spécimen
Votre choix de méthode de montage doit être entièrement dicté par votre technique de coloration et vos objectifs d'archivage.
- Si votre objectif principal est l'histologie de routine (par exemple, H&E, Trichrome) pour un archivage à long terme : Utilisez un milieu de montage résineux, non aqueux, après une déshydratation et un éclaircissement complets.
- Si votre objectif principal est l'analyse des lipides ou la réalisation d'immunofluorescence : Utilisez un milieu de montage aqueux immédiatement après la coloration pour éviter d'endommager les molécules cibles.
- Si votre objectif principal est l'observation de cellules vivantes non colorées (par exemple, des bactéries dans l'eau) : Utilisez un simple montage humide temporaire avec de l'eau ou une solution saline, car aucune conservation permanente n'est nécessaire.
En fin de compte, la sélection du protocole de montage correct est essentielle pour transformer un morceau de tissu coloré en un outil de diagnostic durable et optiquement brillant.
Tableau récapitulatif :
| Méthode de montage | Idéal pour | Caractéristiques clés |
|---|---|---|
| Milieux de montage résineux | Histologie de routine (H&E), archivage permanent | Clarté optique supérieure, conservation à long terme, nécessite une déshydratation |
| Milieux de montage aqueux | Immunofluorescence, colorations lipidiques, coupes congelées | À base d'eau, préserve les cibles sensibles, semi-permanent |
| Montages humides temporaires | Observation de cellules vivantes, examens rapides | Préparation simple, utilisation immédiate, non destiné au stockage à long terme |
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